細胞名稱：人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞-永生化
種屬：人
組織來源：視網(wǎng)膜
永生化方法：轉(zhuǎn)入 Sv40 T 基因
培養(yǎng)特性：貼壁
安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作， 并請注意防護

配套培養(yǎng)基：內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)液

溫度：37 ℃
氣相：95%空氣，5%二氧化碳細胞復(fù)蘇：注意:1.低溫保存的細胞非常脆弱，請將凍存管放入 37℃的水浴中解凍，盡快復(fù)蘇細胞。2.提前室溫預(yù)熱培養(yǎng)基。
1.在無菌區(qū)準備好 T-25 培養(yǎng)瓶加入約 5ml 培養(yǎng)基。
2.將凍存管放入 37℃水浴中，握住凍存管晃動，直到內(nèi)容物完全融化。立即將凍存管從水浴中取出，擦干并噴灑 75%乙醇，移至無菌區(qū)。
3.小心地拆卸蓋子，不要碰到里面的螺紋，用移液槍輕輕吸出細胞，加入到準備好的培養(yǎng)瓶中。
注意:由于本公司采用 Sciencell 公司凍存液，因此不建議在解凍后進行細胞稀釋和離心。
4.輕輕搖動培養(yǎng)瓶使細胞均勻分布。如有必要，松開閥蓋，以便氣體交換。
5.將培養(yǎng)瓶放入 CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
6.過夜后，觀察細胞形態(tài)并更換培養(yǎng)基。傳代：收到細胞后，請對細胞培養(yǎng)瓶外表進行消毒，將細胞置于培養(yǎng)箱中進行 1-2 小時的緩沖， 待細胞恢復(fù)基本生長狀態(tài)后，進行后續(xù)細胞實驗。
在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：
（一）細胞未長至 85%時，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到生物操作臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，若培養(yǎng)瓶上無特殊標注，吸去剩余培養(yǎng)液，只留 6-8ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
（二）細胞已長滿（達 85-95%）。即可進行傳代，具體步驟如下：
1.棄去培養(yǎng)液，用PBS 洗滌 1-2 次；
2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化約 3min，顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞回縮變圓、透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落，則迅速拿回操作臺，加入至少雙倍的終止液，終止消化并輕輕吹打細胞，使其變成單細胞懸液；
3.將細胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min，棄上清，輕彈管底，將細胞彈散；
4.加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代；
5.如果沒有特別說明，建議收到細胞后的第一次傳代比例為 1:2。
注：1.觀察細胞密度最好用（4X 物鏡）低倍鏡觀察，以便正確的判斷細胞密度；觀察細胞形態(tài)請用（10X 或 20X）高倍鏡觀察；
2.推薦使用 0.05%胰酶/EDTA 消化液;
3.瓶中運輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)；
4.有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶內(nèi)。 凍存條件：70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%胎牛血清+10%DMSO 保存條件：液氮存儲
供應(yīng)限制： 僅供研究之用
常見問題及解決方案
1.在收到細胞后先觀察培養(yǎng)瓶是否破裂，漏液等，如遇到上述問題請及時拍照并與我們聯(lián)系。
2.貼壁細胞：培養(yǎng)瓶不開封，顯微鏡下檢查細胞狀態(tài)，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。
1-2 小時后觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余少量漂浮的細胞可以去掉，留 8-10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度到達 85%左右，進行消化傳代； 如細胞仍不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，注意觀察。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色鑒定細胞活力，并請及時拍照（多倍數(shù)多視野）， 包括染色照片，并聯(lián)系我們。（以上僅為貼壁細胞處理方法）
3.懸浮細胞：培養(yǎng)瓶不開封，顯微鏡下檢查細胞狀態(tài)，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。
1-2 小時后觀察，將整瓶細胞及培養(yǎng)液分批離心（1000rmp, 5min），加入適量培養(yǎng)基，根據(jù)離心后的細胞量進行放回培養(yǎng)或分瓶培養(yǎng)。（以上僅為懸浮細胞處理方法）
4.半懸細胞：培養(yǎng)瓶不開封，顯微鏡下檢查細胞狀態(tài)，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。
1-2 小時后觀察，將整瓶細胞培養(yǎng)液上層懸浮細胞離心（1000rmp, 5min），重懸細胞后加入原培養(yǎng)瓶培養(yǎng)至傳代。細胞數(shù)量較大，可將貼壁細胞消化下來，與上層懸浮細胞混勻傳代。重懸上層懸浮細胞時必須保持下層貼壁細胞的營養(yǎng)條件，防止貼壁細胞缺乏營養(yǎng)。（以上僅為半懸細胞處理方法）
如遇到細胞培養(yǎng)問題請及時拍照并與我們聯(lián)系，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)。