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人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞
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mingzhoubio@163.com
浙江省寧波市鎮(zhèn)海區(qū)莊市街道興莊路9號
創(chuàng)e慧谷42號樓B幢401室
人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞
人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞
規(guī)格:
貨期:
編號:MZ-3632
品牌:Mingzhoubio
活化細(xì)胞
凍存細(xì)胞
熒光標(biāo)記細(xì)胞
規(guī)格:
T25瓶
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產(chǎn)品名稱
人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞
商品貨號
MZ-3632
組織來源
人正常眼組織;人
規(guī)格
5×105cells/T25培養(yǎng)瓶
生長特性
貼壁
細(xì)胞形態(tài)
內(nèi)皮細(xì)胞樣
培養(yǎng)基
M199培養(yǎng)基,含F(xiàn)BS、內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
細(xì)胞污染
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。
細(xì)胞描述
脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)已成為眼科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點之一,目前多數(shù)體外研究應(yīng)用的是人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞或主動脈內(nèi)皮細(xì)胞等容易得到的大血管內(nèi)皮細(xì)胞。由于血管內(nèi)皮細(xì)胞具有器官特異性和組織特異性,用大血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究結(jié)果很難客觀、準(zhǔn)確地解釋CNV的發(fā)生機制。因此,建立脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞(choroidal microvascular endothelial cells,CEC)體外培養(yǎng)體系,對深入研究CNV相關(guān)疾病具有十分重要的價值
細(xì)胞傳代步驟
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞復(fù)蘇步驟
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞凍存步驟
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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